Publication Date:
2024-01-16
Description:
Im Zuge dieser Arbeit konnte das Promotor-Testsystem mit dem Vektor pRL488 erfolgreich etabliert werden. Im Einzelnen wurden folgende Punkte bearbeitet:
1. Die Transformation von Anabaena sp. PCC 7120 mit Hilfe der Elektroporation konnte erfolgreich etabliert werden und war bei 10 kV fiir 2 ms optimal.
2. Die DNA-Fragmente aus den Bereichen vor nifH (Abb.16) und petE (Abb.16) wiesen im Vergleich zur Hintergrundaktivität des pRL488 keine signifikant erhöhte Promotoraktiviät auf (Abb. 29 und Abb.30). Dies lässt vermuten, dass in beiden Fällen die klonierten Fragmente nicht den vollständigen Promotor enthielten und entscheidende Transkriptionsfaktorbindestellen fehlten. Da bisher kaum Promotorstudien an Cyanobakterien durchgeführt wurden, schien zu Beginn dieser Arbeit eine GröBe von 700 bis 1100 bp im Vergleich zu typischen Promotoren in E.coli wie Ptac, Ptrp und Para (Lewin, 2000) ausreichend zu sein. In diesen Fällen müssen jedoch die Promotoren mehr als 870 bp umfassen.
3. Nur in Kulturen, die unter Stickstoffmangel angezogen wurden konnte eine Aktivität der aufnehrnenden Hydrogenase gemessen werden (Abb.26) Diese Enzymaktivität kann daher als Marker für die Bildung von Heterocysten angesehen werden. Die Aktivität der bidirektionalen Hydrogenase ist in Kulturen mit Heterocysten deutlich höher (Abb.27). Inwieweit dies auf eine verstärkte Expression des Enzyms in den Heterocysten zuruckzuführen ist, sollte uber weitergehende zellspezifische Promotoranalysen geklärt werden.
4. Unter den DNA-Fragementen aus den Genclustern der bidirektionalen Hydrogenase (vor alr0760, vor hoxU und hoxH) hatte nur das Fragment vor dem Leserahmen alr0760 eine deutliche Promotoraktivität (Abb.34), während die Bereiche vor hoxU und hoxH nicht von der Aktivität der Kontrolle zu unterscheiden sind (Abb.31). Dieses Ergebnis spricht dafür, dass die Transkription aller Gene von alr0760 bis hoxH in diesem Cluster von einem Promotor vor alr0760 gesteuert wird und entsprechend diese Gene auf einem Transkript liegen.
5. Zur Herstellung eines Promotor-Testsystems mit GFP wurden zwei verschiedene Klonierungsstrategien entwickelt und ein Vektorkonstrukt zur Insertion des gfp-Gens in den pRL488 konstruiert.
Type:
Thesis
,
NonPeerReviewed
Format:
text
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