ISSN:
1432-1440
Keywords:
Glycosilated hemoglobins
;
Chromatographic determination
;
Diabetes mellitus
;
Metabolic control
;
Glykosilierte Hämoglobine
;
Chromatographische Bestimmung
;
Diabetes mellitus
;
Stoffwechselüberwachung
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
Description / Table of Contents:
Zusammenfassung Zur routinemässigen Bestimmung glykosilierter Hämoglobine (HB AI) wird eine einfache und schnell durchzuführende Bestimmungsmethode benötigt, die die Analyse größerer Probenzahlen erlaubt. In Anlehnung an chromatographische Trennungsverfahren für Hämoglobin wurde eine Mikrosäulenmethode entwickelt, mit der die glykosilierten Hämoglobine AIa+b+c gemeinsam als HB AI erfaßt werden und sich von der Hämoglobin-Hauptfraktion HB AII abtrennen lassen. Hierzu werden Chromatographiesäulen (7,0×1,3 cm) bis zu einer Betthöhe von 3 cm mit Bio-Rex 70 gefüllt. Hämoglobin wird als Hämolysat (1,8 mg/200 µl) aufgegeben und mit zwei Puffern unterschiedlicher Ionenstärke und unterschiedlichem pH-Wert in zwei Fraktionen als HB AI und HB AII eluiert. Bei exakter Standardisierung der Elutionsvolumina (18 ml), der Elutionstemperatur (21,5° C) und des pH-Wertes (6,74) des zur Trennung verwendeten Puffers lassen sich sehr gut reproduzierbare Ergebnisse erzielen (Intraassay-VK: 2,38%; Interassay-VK: 3,68%). Die Extinktionsmessung der Hämoglobinfraktionen erfolgt entweder als Cyanhämoglobin bei 413 nm oder 415 nm oder als Cyanmethämoglobin bei 419 nm. Die HB AI-Konzentration wird in Prozent des Gesamthämoglobins angegeben. Die Methode ermöglicht es, den HB AI-Gehalt von 40 Blutproben als Triplikate innerhalb von vier Stunden zu bestimmen. Der Normwert, ermittelt an 25 normalgewichtigen stoffwechselgesunden Personen, betrug 6,88±0,41% $$(\bar x \pm S.D.)$$ , woraus sich eine obere Normgrenze von 7,7% errechnet. Bei 103 Patienten mit normaler Glucosetoleranz fanden sich im gleichen Bereich liegende Werte: 6,45±0,61% $$(\bar x \pm S.D.)$$ . Bei 121 Diabetikern mit unterschiedlich guter Stoffwechseleinstellung bestanden dagegen HB AI-Erhöhungen bis zu 20,58%.
Notes:
Summary For routine determination of glycosilated hemoglobin (HB AI) it is necessary to have a quick and easy assay which allows analysis of a greater number of samples. Taking into consideration known methods for hemoglobin chromatography a microcolumn technique has been developed, which separates the glycosilated hemoglobins AIa+b+c from the main hemoglobin fraction HB AII. Micro-columns (7.0×1.3 cm) are filled up to a bed-height of 3 cm with Bio-Rex 70. Hemoglobin is given to these in hemolysate from (1,8 mg/200µl) and separated with two buffers of different ionic-strength and different pH-values into two fractions HB AI and HB AII. With exact standardisation of the elution volumes (18 ml), the elution temperature (21.5° C) and pH-value (6.74) of the first elution buffer a high reproducibility of the results is possible (Intraassay-VK: 2.38%; Interassay-VK: 3.68%). The optical density of the hemoglobin fractions is read for cyanhemoglobin at 413 nm or 415 nm or for cyanmethemoglobin at 419 nm. The HB AI-concentration is given as a percentage of the total hemoglobin. This method enables the determination of HB AI-value of 40 blood samples in triplicate within four hours. The normal value derived from 25 healthy and normal weight volunteers is 6.88±0.41% $$(\bar x \pm S.D.)$$ , from which an upper normal range of 7.7% has been calculated. In 103 patients with unimpaired glucose tolerance values were observed in similar range: 6.45±0.61% $$(\bar x \pm S.D.)$$ . In 121 diabetic patients with varying metabolic control HB AI-values up to 20.58% were noted.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF01476579
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