ISSN:
1437-1596
Keywords:
Gc-subtyping
;
comparative study
;
Gc-Subtypen, Methodenvergleich
;
Semi-dry-Electroblot
;
Enzymgekoppelte Antigen-Antikörperreaktion
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Medicine
,
Law
Description / Table of Contents:
Zusammenfassung In der vorliegenden Studie werden Methoden zum Nachweis und zur Darstellung der Gc-Subtypen verglichen. Die isoelektrische Fokussierung findet im Agarosegel pH 4–6 und im Polyacrylamidgel pH 4,5–5,4 Anwendung. Die Nachweismethoden der direkten Immunfixation mit Anti-Gc, der Immunfixation mit anschließendem Enzym-Antikörperkomplex, des passiven Blot und des Semi-dry-Electroblot hinsichtlich ihrer Empfindlichkeit und Nachweisgrenzen werden überprüft. Erste Untersuchungen an auf Baumwollstoff angelegten Blutspuren unterschiedlichen Alters schließen sich an. Die Auftrennung des Gc-Proteins im Polyacrylamidgel erweist sich als Methode der Wahl, insbesondere wegen guter Bandenschärfe und genügend großem Korridor zwischen den 1S- und 1F-Banden. Innerhalb der Darstellungstechniken ist eindeutig dem Semi-dry-Electroblot mit anschließender enzymgekoppelter Antigen-Antikörperreaktion der Vorzug zu geben. Hier erfolgt durch eine vertikale Elektrophorese ein annähernd 100%iger Transfer des aufgetrennten Gc-Proteins in eine Nitrozellulosemembran, welche im nachfolgenden 2-Schrittverfahren (Antigen-Antikörperreaktion und gekoppelte Enzym-Substratreaktion) zur Darstellung desselben eingesetzt wird. Durch Kombination dieser Techniken können maximale Serumverdünnungen von über 1/500 bestimmt werden; ferner lassen sich nach ersten Versuchen Blutspuren bis zu einem Mindestalter von 20 Wochen bei Raumtemperaturlagerung eindeutig typisieren.
Notes:
Summary A comparison of separation and detection techniques has been carried out to determine the most suitable combination for use in Gc-subtyping. The best results (i.e., high sensitivity, distinct bands, especially with reference to the 1S and 1F separation) were achieved using isoelectric focusing in polyacrylamide gel (pH 4.5–5.4) followed by transfer to nitrocellulose membrane by electroblotting and finally detection with enzyme-linked antibody complex.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00200340
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