In:
Brazilian Archives of Biology and Technology, FapUNIFESP (SciELO), Vol. 44, No. 2 ( 2001-06), p. 165-171
Abstract:
O objetivo deste trabalho foi avaliar a endocitose de duas proteínas de Bence Jones por células renais, com a finalidade de elucidar a interferência de características físico-químicas na nefrotoxicidade. As proteínas de Bence Jones (denominadas AK e GL) forma purificadas e isoladas da urina de dois pacientes com mieloma múltiplo. Isótopos de ambas as proteínas foram caracterizdos como sendo cadeias leves lambda monoclonais humanas. AK apresentou principalmente pI 〉 7,0, alto conteúdo de galactose e baixo teor de moléculas de ácido siálico. Por outro lado, GL apresentou uma única banda com pI 4,3, maior teor de ácido siálico e baixo teor de galactose, em comparação com AK. Células renais de hamster, BHK (Baby Hamster Kidney) foram mantidas em cultura à temperatura de 37ºC, utilizando meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino, em pH 7,4. Quando confluentes, as céluals BHK foram incubadas com as duas proteínas dissolvidas em meio isento de soro, durante 1, 5, 15, 30, 60 minutos e 24 horas. Foi omitida a incubação com proteínas de Bence Jones em células usadas como controle. Com o término da incubação, as células foram lavadas, tripsinizadas, centrifugadas e fixadas em solução de paraformaldeído 4,0% e glutaraldeído 0,5% em tampão fosfato 0,1M pH 7,4. A seguir, os pellets obtidos foram processados para microscopia e incluídos em LRWhite. Cortes semi-finos foram colhidos e submetidos a reações imunocitoquímicas, utilizando proteína A-acoplada a ouro coloidal e intensificação pela prata. A detecção da marcação foi avaliada em microscopia de luz. Os resultados mostraram que a proteína GL tendeu a ser direcionada para localização peri-nuclear. Por outro lado, AK demonstrou um comportamento diferente. Os dados indicaram que houve uma contribuição direta das características físico-químicas das proteínas no direcionamento intracelular.
Type of Medium:
Online Resource
ISSN:
1516-8913
DOI:
10.1590/S1516-89132001000200009
Language:
Unknown
Publisher:
FapUNIFESP (SciELO)
Publication Date:
2001
detail.hit.zdb_id:
2122231-9
SSG:
12
Permalink